ECC是一種化學感受態(tài)細胞，經(jīng)過特殊的方法制備，不需要熱激以及額外培養(yǎng)恢復等過程，可實現(xiàn)簡單快速高效的質粒轉化。ECC的制備過程、解凍方法、與質粒DNA混合以及混勻方式較經(jīng)典方法有所不同，是其實現(xiàn)快速高效轉化的關鍵。ECC轉化效率為10＾８-10＾９/ug pUC19 DNA，可用于克隆、亞克隆、基因文庫構建等研究。
詳細說明
-70℃，六個月有效
1、培養(yǎng)皿提前預熱平衡至室溫或37℃。
2、將適量體積的質粒DNA或連接產(chǎn)物置于1.5 ml試管中進行冰預冷。
3、從低溫冰箱中取出ECC，用手指快速反復擦拭試管外壁，直至約1/3 ECC融化。
4、用吸頭輕輕攪拌均勻，快速移取10-100 μl ECC加入已預冷的質粒DNA、連接或重組產(chǎn)物中。
5、立即進行中低速（渦旋儀速度建議調至50%）渦旋點振蕩3次，每次不超過1 sec。
6、質粒轉化液可直接鋪板培養(yǎng)，而連接或重組產(chǎn)物轉化時，冰上靜置5 min。
7、取全部轉化菌液鋪到提前預熱好的培養(yǎng)皿上，放置37℃培養(yǎng)箱過夜。
A、ECC細胞在半融化狀態(tài)下轉化效率更高，為避免使用時完全融化，請勿用水浴快速融化、勿用手緊捂著融化，而是用手指反復擦拭試管外壁使其融化，并隨時觀察融化狀態(tài)。一般1 min左右底部可見少量融化液體，融化約1/3時，立即用移液槍吸頭輕輕攪拌至可以吸取的狀態(tài)，按DNA/ECC體積比<10%吸出需要量并立即加入到質粒DNA中（亦可以把預冷質粒、連接或重組產(chǎn)物直接加入半融化ECC中），依照建議方法混勻。批量轉化時，ECC細胞可冰浴融化，但融化后應盡快使用以免轉化效率下降。
B、ECC和質粒DNA混勻時，將渦旋儀轉速調至中檔可充分混勻且不損傷細胞，快速點振蕩3次，每次時間不要超過1 sec（避免用移液槍吹打、攪勻、或用手指彈勻，以免混勻不充分），立即鋪板培養(yǎng)，或冰浴5-30 min，之后不需要熱激活即可鋪板培養(yǎng)。
C、在鋪板培養(yǎng)之前，ECC和質粒DNA混勻后適當延長冰浴時間（可至2 hr），以及培養(yǎng)板在室溫或37℃預熱30 min，都可以進一步提高轉化效率。若采用經(jīng)典轉化方法，ECC可獲得更高的轉化效率（>109）。
